Холестерин – враг человека и друг в одном лице. Находясь в пределах нормы, он во всем помогает организму: участвует в синтезе гормонов, витаминов, транспорте необходимых веществ в крови, но стоит ему выйти из-под контроля, он начинает проказничать, появляются холестериновые бляшки, ухудшается самочувствие, нарушается работа печени и сердца. Человек должен следить за содержанием этого ЛПНП в крови и регулярно его проверять. Какое существует лабораторное определение этого показателя? Для этого нужен набор для определения общего холестерина.
Методы определения
Холестерин необходим для нормального функционирования всех систем организма, но его бесконтрольное повышение негативно отражается на состоянии крупных артерий, гормонального фона, работы сердца и мышечной ткани. Со временем развивается атеросклероз, воспаление печени, застой желчи и другие заболевания. Даже соблюдая безхолестериновую диету, человек может иметь повышенный уровень ЛПНП из-за проблем с желчным пузырем, печенью и другими органами.
В домашних условиях провести определение содержания ЛПНП в крови химическим способом невозможно, на помощь придет лишь специальный прибор, но техника может давать погрешности.
Точно сказать содержание общего холестерина в крови смогут сказать только лабораторные анализы, необходимый набор реагентов. Сегодня существуют различные методы определения, популярными среди которых являются:
- Златкиса-Зака;
- Илька;
- по набору «Новохол».
Метод Златкиса-Зака
Он позволяет точно определить содержание общего холестерина в сыворотке крови, так как в реакцию вступает и его свободные молекулы, и связанные эфирными связями с другими веществами. Набор реагентов включает:
- уксусную кислоту;
- серную кислоту;
- фосфатную кислоту;
- хлорное железо.
В смесь кислот добавляется сыворотка крови, после чего она окисляет при добавлении хлорного железа, при этом цвет жидкостей меняется в пределах красной оттеночной гаммы (от ярко-красного до темно-бордового). Норма содержания ЛПНП в крови по методу Златкиса-Зака колеблется в пределах 3,2-6,4 ммоль на литр.
На цвет прореагировавшего раствора влияет билирубин, гемоглобины, каротиноиды, а также температурный режим во время эксперимента.
Метод Илька
В набор реагентов для этого входят:
- концентрированная серная кислота;
- ледяная уксусная кислота;
- уксусный ангидрид.
Эти три реагента смешивают в определенных пропорциях, создавая сильно кислую среду, после этого их добавляют к сыворотке крови (к которой предварительно добавляют определенные реагенты: этиловый спирт и хлороформ).
Реакция Илька сложная и очень опасная из-за кислот, поэтому проводить ее может только химик. Норма холестерина, определяемая по этому методу – 4,65-6,45 ммоль на литр. Окрашивается смесь во время реакции в разные оттенки зеленого, но цвет может варьировать от синего до красного, на это влияет билирубин в крови, температурный режим во время проведения анализа.
Метод по набору «Новохол»
Он значительно безопаснее всех остальных, его можно при желании провести даже дома, но эффективность будет значительно ниже. В набор реагентов для определения содержания ЛПНП в крови входят разные ферменты:
- холестеролэстераза;
- холестеролоксидаза;
- пероксидаза;
- аминоантипирин (не фермент).
Определение простое: сначала к сыворотке крови (слюне, желчи или спинномозговой жидкости) добавляют холестероэстеразу, расщепляющую эфирные связи холестерина с другими веществами, тем самым превращая его в свободный. Это нужно для того, чтобы все холестериновые молекулы вступили в реакцию (связанные с чем-то они не реагируют).
После этого в ход идет холестеролоксидаза, окисляющая холестерин до холестинона с выделением перекиси водорода. После этого добавляются два последних реагента: пероксидаза и аминоантипирин. Пероксидаза катализирует окисление водородом последнего.
Реакция на последнем этапе сопровождается сменой цвета, который может меняться от розового до темно-малинового. На него помимо самого холестерина влияют оксикортикостероиды и остатки в крови активных веществ препаратов-антикоагулянтов (оксалаты, фториды).
Норму определения общего холестерина точно скажет только врач, потому как она зависит от возраста человека и меняется в зависимости от биологической жидкости, взятой для анализа.
Определение свободного холестерина
Иногда требуется определение только свободного холестерина крови, так как именно он влияет на образование атеросклеротических бляшек на стенках артерий, а также провоцирует проблемы с печенью и сердцем.
Для того чтобы провести анализ сначала из биологической жидкости (чаще сыворотки крови) экстрагируют холестерин – делают вытяжку при помощи этилового спирта. Этот концентрат можно позже использовать как для определения общего содержания ЛПНП, так и для анализа только свободных их молекул.
После приготовления экстракта холестерин переводят в осадок, используя разный набор реагентов:
- дигитонин;
- томатин;
- пиридинсульфат.
Они связываются с молекулами холестерина и делают его нерастворимым, осаждая вниз пробирки. После этого специфичными реагентами растворяют отобранное осажденное вещество и определяют количество ЛПНП.
Для поддержания постоянного уровня ЛПНП и необходимо регулярно делать анализы и определять его количество в крови. Эффективнее и качественнее делать это в медицинских лабораториях, ведь большинство методов исследования состава сыворотки требуются опасные и малодоступные реагенты.
